pUASTattB ショウジョウバエ遺伝子発現ベクター
(プロモーター選択可)
当社のpUASTattBベクターシステムはバクテリオファージφC31インテグラーゼによるトランスジェニックハエの高効率な作製が可能です。加えて、任意のプロモーターを選択することで目的遺伝子の遍在的もしくは組織特異的な発現、さらに発現の制御が可能になります。pUASTattBベクターシステムはpUASTと共通する点がありますが、遺伝子の導入にP因子トランスポゾンをつかうのではなくφC31インテグラーゼを利用する点が異なります。
バクテリオファージφC31はattP(phage attachment sites)とattB(bacterial attachment sites)サイトの配列特異的な組み換えを媒介するインテグラーゼです。pUASTattBのattPへの挿入はφC31インテグラーゼに認識されないattL、attRサイトを作り出すために、P因子トランスポゾンによる組み換えとは違ってφC31インテグラーゼによる組み換えは不可逆的になります。加えて、φC31インテグラーゼによる組み換えはattPサイト特異的なので、その他の配列への挿入は起こりません。pUASTattBベクターシステムはゲノムのattP“着地点”サイトをもつ特定のショウジョウバエ株にのみ使用できます。
pUASTattBベクターシステムはE.coliプラスミドとして設計された2つのベクターから構成されています。ひとつめはpUASTattBベクター(またはφC31ドナーベクター)とよばれ、attBサイトと目的遺伝子が組み込まれています。ふたつめはφC31ヘルパープラスミドと呼ばれ、φC31インテグラーゼが組み込まれています。pUASTattBとφC31ヘルパープラスミドがattPサイトをもつ宿主細胞に同時に注入されると、φC31インテグラーゼによるattPとattBの組み換えが起こりpUASTattBが宿主ゲノムへ挿入されます。pUASTattBベクターのmini white遺伝子は目の色を決定し、遺伝子導入が成功したトランスジェニックハエの同定に使われます。
φC31インテグラーゼを宿主ショウジョウバエの細胞へ導入する方法はいくつかあります。ひとつめは標的とする細胞にin vitro転写反応によって生産されたmRNAを注入する方法です。ふたつめはφC31ヘルパープラスミドをpUASTattBと共に標的細胞に注入する方法です。みっつめは生殖細胞でφC31インテグラーゼを発現するショウジョウバエ株を利用する方法があり、高効率な遺伝子挿入ができます。
pUASTattBベクターシステム(プロモーター選択可)は実験目的に応じて当社のショウジョウバエプロモーターデータベースから任意の遺伝子発現用プロモーターを選択できます。当社のデータベースから次のようなプロモーターを選択できます。遍在的プロモーターとしてアクチン5C、ポリユビキチン、アルファ1チューブリン;組織特異的プロモーターとしてRh2(単眼特異的)、そして誘導型プロモーターとしてCu2+存在下で活性化するMtnプロモーターなどが選択できます。
当ベクターシステムに関する詳細な情報ついては下記の論文を参照してください