アデノウイルスパッケージング

アデノウイルスベクターは、宿主ゲノムに組み込まれずベクターがエピソームDNAとして残るため、多種多様な哺乳類動物細胞型において、高レベルの遺伝子導入に使用されています。高い形質導入効率及び高いレベルの短期間遺伝子発現は、アデノウイルスベクターをin vivo遺伝子デリバリーに好ましい手段とし、しばしば遺伝子治療およびワクチン接種に使用されます。 VectorBuilderは独自の技術と試料をもちい、ウイルスのタイター、純度、生存率、均一性に優れたプロトコールを開発しました。 ユーザ―満足度の高さは、VectorBuilderのグローバルユーザーの高いリピート率に現れています。
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アデノウイルスの種類

HAd5アデノウイルス(E1/E3を欠失)

価格と作業日数 

VectorBuilderのアデノウイルスは常に技術的改良を加え、高品質のウイルスを早い作業日数で受託作製することを努めています。

表1以上のスケールのウイルスのお見積りは、デザインリクエストを送るからお問い合わせください。

表1:カスタムウイルス仕様

スケール 推奨の使用系 タイター *と仕様 価格(税抜き) 作業日数**
パイロット 培養細胞 >1010 PFU/ml, 10x25 ul, HBSS buffer 66,000円 20-32 営業日
中容量 培養細胞 >1010 PFU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 92,000円 20-32 営業日
大容量 培養細胞 >1011 PFU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 144,000円 20-32 営業日
超純粋大容量 培養細胞とin vivo >1012 VP/ml, 10x100 ul, GTS buffer 209,000円 22-36 営業日

* ウイルスタイター保証について:VectorBuilderで受託構築したアデノウイルスベクターからアデノウイルスパッケージングを引き続きご注文いただき、かつパッケージングされる5’ITRから3’ITRまでの長さが38.7kb 以下の場合、タイターを保証いたします。

以下の場合、タイター保証は適用外となっています。

  • パッケージング上限サイズを超えた場合(5’ITRから3’ITRの長さが38.7kb以上):上限サイズを超えるとウイルスは不安定となり、パッケージされたDNAフラグメントにリアレンジメントやDNA欠損などが生じることが広く知られています。ウイルス粒子へのパッケージングは可能ですが、搭載した遺伝子の機能欠損やタイターの極端な低下が生じることも知られています。
  • ウイルスベクターに搭載されたORFがパッケージング過程に負の影響を及ぼす場合:細胞毒性を持つ遺伝子(例、プロアポトーシス遺伝子群)、パッケージング細胞やウイルスの生合成に影響を与える遺伝子(例、凝集性を持つ膜タンパク遺伝子)、遺伝子シークエンスが塩基配列のリアレンジメントや二次構造をとるような遺伝子(例、反復配列や高GC-richシークエンス)。
  • ユーザーご提供のプラスミドDNAを使ってウイルスパッケージングを行わせていただく場合:弊社のウイルスパッケージングプロトコールは、弊社で構築したベクターバックボーンに対して最適化されています。また、弊社にシークエンスを公開できないプラスミドDNAや、非定型のアデノウイルス機能シークエンス(例、ITRなど)からのパッケージングには不確定要素が多く、タイター保証のご提供には限界があります。

その他、お見積りの際に弊社よりご連絡させていただいたタイターリスクを、ユーザーにご同意いただき、パッケージングを受注させていただいた場合、できる限り高タイターでの納品を行いますが、生物学的に無理な場合もございます。ご了承ください。パッケージングの進捗に関しては弊社にメールにてお問い合わせください。

**出荷までの作業日数は、ご注文いただいた受託サービスが弊社で受注され、製造が完了し出荷されるまでの期間です。ユーザーご提供のプラスミドDNAを使っての受託ウイルスパッケージングの場合、プラスミドDNAの受け入れやQCチェックにかかる日数は作業日数に含まれていません。

納品形態

パイロット、中容量、大容量のアデノウイルス粒子の納品物と納品形態:

  • カスタムアデノウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • 無料コントロールウイルス(1または2本のマイクロチューブに分注)*
  • カルタヘナ法26条1項情報公開書類(メール添付)
  • ウイルス品質検査証明書COA

超純粋大容量(in vivoグレード)のアデノウイルス粒子の納品物と納品形態:

  • カスタムアデノウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • ”追加”注文(オプション)された場合、超純粋コントロールウイルス(カスタムウイルスと同量を低価格でご提供。10本のマイクロチューブに分注)*
  • カルタヘナ法26条1項情報公開書類(メール添付)
  • ウイルス品質検査証明書COA
* コントロール用に、カスタムウイルスと同一実験系のウイルスベクターをパッケージングしたウイルスをご提供しています。トランスダクション効率を検証するためのコントロールのため、カスタムベクターデザインの実験用コントロールではないことをご了承ください。例えば、カスタムウイルスが、GOIの強制発現であれば、コントロールはEGFPを強制発現するウイルスとなっています。カスタムウイルスがGOIのshRNAを発現する場合は、コントロールはscramble shRNAを発現するウイルスとなっています。
表2:コントロールウイルス仕様

ベクター

システム

コントロールベクター名称 コントロールベクタ-ID カスタムウイルスのサイズ コントロールウイルスの仕様

価格

(税抜き)

アデノウイルス 

遺伝子発現システム

pAV[Exp]-CMV>EGFP VB150925-10024 パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x100 ul in GTS 79,000円

アデノウイルス U6プロモーターshRNA ノックダウンシステム

pAV[shRNA]-EGFP-U6>
Scramble_shRNA
VB161026-1127kyf パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x100 ul in GTS 79,000円

アデノウイルスmiR30型 shRNAノックダウンシステム

pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA VB180124-1101mjs パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x100 ul in GTS 79,000円

アデノウイルス CRISPR システム

pAV[Exp]-CMV>EGFP VB150925-10024 パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x100 ul in GTS 79,000円
ウイルス粒子作製、精製、タイター測定

解析対象遺伝子(gene of interest :GOI)をクローニングしているアデノウイルスベクターをPacI 制限酵素でリニア化します。リニア化されたベクターDNAを、アデノウイルス遺伝子E1を発現しているパッケージング細胞に形質導入し、細胞に組み換えアデノウイルスを生合成させ、培養液中に放出されたアデノウイルス粒子を回収します。in vivo用の超純粋ウイルス精製には、回収したウイルスを含む培養液を塩化セシウム密度勾配超遠心分離にかけ、精製とウイルス液の濃縮を行います。タイター測定は、アデノウイルス特異的なhexonタンパク質を免疫学的手法で同定して求めています。さらに 超純粋品質のウイルス製品は、アデノウイルス粒子のOD260値を測定し、optical densityからウイルスタイターを求めています。

タイター測定方法に関する詳しい説明

品質

ベクタービルダーで受託作製されるアデノウイルス製品は、タイター測定値、バクテリアや菌類の滅菌性の検査、マイコプラズマのコンタミ検査の品質テスト結果をお付けしています。またアデノウイルスベクターに蛍光マーカーが組み込まれている場合は、細胞に感染させて蛍光マーカーの発現確認も行います。

超純粋品質のアデノウイルス製品は、エンドトキシンアッセイの検査結果もお付けしています。

ユーザーご提供のトランスファーベクターからのウイルス粒子受託作成について

ユーザーお手持ちのウイルスベクターからウイルス粒子の受託作製も受注しています。 ウイルスベクターはマテリアルサブミッションガイドに沿って弊社にお送りください。お受け取りしたプラスミドベクターは、QCチェックとして、マキシプレップ、プラスミドの制限酵素サイトの確認と、サンガーシークエンシングでのシークエンスの確認を行います。一律13,000円のQCチェック費用をお見積りに加算させていただいています。 QCチェックに合格後、ご注文のウイルスパッケージングサービスを行います。ウイルスパッケージングのお見積りの作業日数には QCチェックにかかる日数(通常5営業日)は含まれていません。あらかじめご了承ください。

ご質問

よくあるご質問は Vector FAQ からご覧になれます。弊社からご提供させていただいている受託サービスについて、もっと詳細な情報が必要な場合は、 ベクタービルダー・ジャパンのサービスサポートまでお問合せください。

マイベクターをデザインする 

オンラインポータルを使って、自分でベクターデザインを行い、そのベクターの見積もりを依頼する場合。

デザインリクエストを送る 

ベクタービルダーにベクターデザインと見積もりの両方を依頼する場合。その他のカスタム受託サービスのお見積りもここからお問い合わせください。