アデノウイルスパッケージング

アデノウイルスベクターは、宿主ゲノムに組み込まれずベクターがエピソームDNAとして残るため、多種多様な哺乳類動物細胞型において、高レベルの遺伝子導入に使用されています。高い形質導入効率及び高いレベルの短期間遺伝子発現は、アデノウイルスベクターをin vivo遺伝子デリバリーに好ましい手段とし、しばしば遺伝子治療およびワクチン接種に使用されます。 VectorBuilderは独自の技術と試料をもちい、ウイルスのタイター、純度、生存率、均一性に優れたプロトコールを開発しました。 ユーザ―満足度の高さは、VectorBuilderのグローバルユーザーの高いリピート率に現れています。
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アデノウイルスの種類

HAd5アデノウイルス(E1/E3を欠失)

価格と作業日数 

VectorBuilderのアデノウイルスは常に技術的改良を加え、高品質のウイルスを早い作業日数で受託作製することを努めています。

この表以上のスケールのウイルスのお見積りは、デザインリクエストを送る、からお問い合わせください:

スケール 推奨の使用系 タイター *と仕様 価格(税抜き) 作業日数**
パイロット 培養細胞 >1010 PFU/ml, 10x 25 ul, HBSS buffer 64,000円 20-32 日
中容量 培養細胞 >1010 PFU/ml, 10x 100 ul, HBSS buffer 89,000円 20-32 日
大容量 培養細胞 >1011 PFU/ml, 10x 100 ul, HBSS buffer 139,000円 20-32 日
超純粋大容量 培養細胞とin vivo >1012 VP/ml, 10x 100 ul, GTS buffer 201,500円 22-36 日

* ウイルスタイター保証について:VectorBuilderで受託構築したウイルスベクターからウイルスパッケージングの受注で、かつパッケージングされる5’ITRから3’ITRまでの長さが38.7kb 以下の場合、タイター保証をご提供しています。上限サイズを超えるとアデノウイルスは不安定となり、パッケージされたフラグメントにリアレンジメントが発生するリスクがあります。上限サイズを超えた場合でもウイルスパッケージングは可能ですが、生成されたウイルス粒子は機能欠失を生じ、タイターの低下が起こることが広く知られています。できる限り高タイターでの納品を行いますが、価格表に提示されたタイター保証は適用外とさせていただくことをご了承ください。

以下の場合のタイター保証は適用外となっています。ご了承ください: 

  • ベクターにクローニングされているシークエンスがパッケージングプロセスに悪影響を及ぼすと考えられるもの。例えば、細胞毒性を持つproapoptotic遺伝子群、細胞凝集を誘引する膜タンパク質シークエンス、パッケージング細胞またはウイルスの生合成に負の影響を生じる遺伝子、反復シークエンスや高GCリッチシークエンスなど、ベクタークローニングの際にリアレンジメントや二次構造を生じる可能性の高いシークエンスを含むベクターの場合
  • ユーザー提供のウイルスベクターを使うウイルスパッケージングのご注文の場合。弊社のウイルスパッケージングプロトコールは、弊社のベクター構築用のコンポーネントやベクターバックボーンに対して最適化を行っているため、ユーザー提供のウイルスベクターからの高タイターパッケージングには不確定要素が多いため、保証には限界があります。

** 出荷までの作業日数は、ご注文いただいた受託サービスが弊社製造ラインで開始し、製造が完了し出荷されるまでの期間です。ユーザー提供のウイルスプラスミドDNAを使っての受託ウイルスパッケージングの場合、プラスミドDNAの受け入れやQCチェックにかかる日数は作業日数に含まれていません。

納品形態

パイロット、中容量、大容量のアデノウイルス粒子の納品物と納品形態:

  • カスタムアデノウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • 無料コントロールウイルス(1または2本のマイクロチューブに分注)*

超純粋大容量(in vivoグレード)のアデノウイルス粒子の納品物と納品形態:

  • カスタムアデノウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • ”追加”注文(オプション)された場合、超純粋コントロールウイルス(カスタムウイルスと同量を低価格でご提供。10本のマイクロチューブに分注)*
* コントロール用に、カスタムウイルスと同一実験系のウイルスベクターをパッケージングしたウイルスをご提供しています。トランスダクション効率を検証するためのコントロールのため、カスタムベクターデザインの実験用コントロールではないことをご了承ください。例えば、カスタムウイルスが、GOIの強制発現であれば、コントロールはEGFPを強制発現するウイルスとなっています。カスタムウイルスがGOIのshRNAを発現する場合は、コントロールはscramble shRNAを発現するウイルスとなっています。コントロールウイルスの詳細は下の表をご確認ください:

ベクター

システム

コントロールベクター名称 コントロールベクタ-ID カスタムウイルスのサイズ コントロールウイルスの仕様

価格

(税抜き)

アデノウイルス 

遺伝子発現システム

pAV[Exp]-CMV>EGFP VB150925-10024 パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x 100 ul in GTS 62,500円

アデノウイルス U6プロモーターshRNA ノックダウンシステム

pAV[shRNA]-EGFP-U6>
Scramble_shRNA
VB161026-1127kyf パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x 100 ul in GTS 62,500円

アデノウイルスmiR30型 shRNAノックダウンシステム

pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA VB180124-1101mjs パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x 100 ul in GTS 62,500円

アデノウイルス CRISPR システム

pAV[Exp]-CMV>EGFP VB150925-10024 パイロット >1010 PFU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >1010 PFU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋大容量 >1012 VP/ml, 10x 100 ul in GTS 62,500円
ウイルス粒子作製、精製、タイター測定

解析対象遺伝子(gene of interest :GOI)をクローニングしているアデノウイルスベクターをPacI 制限酵素でリニア化します。リニア化されたベクターDNAを、アデノウイルス遺伝子E1を発現しているパッケージング細胞に形質導入し、細胞に組み換えアデノウイルスを生合成させ、培養液中に放出されたアデノウイルス粒子を回収します。in vivo用の超純粋ウイルス精製には、回収したウイルスを含む培養液を塩化セシウム密度勾配超遠心分離にかけ、精製とウイルス液の濃縮を行います。タイター測定は、アデノウイルス特異的なhexonタンパク質を免疫学的手法で同定して求めています。さらに 超純粋品質のウイルス製品は、アデノウイルス粒子のOD260値を測定し、optical densityからウイルスタイターを求めています。

タイター測定方法に関する詳しい説明

品質保証

ベクタービルダーで受託作製されるアデノウイルス製品は、タイター測定値、バクテリアや菌類の滅菌性の検査、マイコプラズマのコンタミ検査の品質テスト結果をお付けしています。またアデノウイルスベクターに蛍光マーカーが組み込まれている場合は、細胞に感染させて蛍光マーカーの発現確認も行っています。さらに超純粋品質のアデノウイルス製品は、エンドトキシンアッセイの検査結果もお付けしています。

ユーザーご提供のトランスファーベクターからのウイルス粒子受託作成について

ユーザーお手持ちのウイルスベクターからウイルス粒子の受託作製も受注しています。 ウイルスベクターはマテリアルサブミッションガイドに沿って弊社にお送りください。お受け取りしたプラスミドベクターは、QCチェックとして、マキシプレップ、プラスミドの制限酵素サイトの確認と、サンガーシークエンシングでのシークエンスの確認を行います。一律12500円のQCチェック費用をお見積りに加算させていただいています。 QCチェックに合格後、ご注文のウイルスパッケージングサービスを行います。ウイルスパッケージングのお見積りの作業日数には QCチェックにかかる日数(通常5営業日)は含まれていません。あらかじめご了承ください。

ご質問

よくあるご質問は Vector FAQ からご覧になれます。弊社からご提供させていただいている受託サービスについて、もっと詳細な情報が必要な場合は、 ベクタービルダー・ジャパンのサービスサポートまでお問合せください。

マイベクターをデザインする 

オンラインポータルを使って、自分でベクターデザインを行い、そのベクターの見積もりを依頼する場合。

デザインリクエストを送る 

ベクタービルダーにベクターデザインと見積もりの両方を依頼する場合。その他のカスタム受託サービスのお見積りもここからお問い合わせください。