レンチウイルスパッケージング

 レンチウイルスは、哺乳類細胞に遺伝子導入を行う際に、最もよく使われるウイルスベクターの一つです。VectorBuilder は独自に開発した技術と試薬を用いて、レンチウイルスパッケージングのプロトコールを常に改良しています。VectorBuilder でベクター構築した第3世代レンチウイルスベクターから、ウイルスパッケージングまでの一連をご注文いただく場合、高タイター、高純度、高いウイルスの生存度と均一性の保証をご提供しています。ユーザ―満足度の高さは、VectorBuilderのグローバルユーザーの高いリピート率に現れています。
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レンチウイルスパッケージングサービスのご注文方法

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レンチウイルスの種類
  • 第3世代レンチウイルス(デフォルトご注文): Envelope plasmid (VSV-G pseudotyped), Packaging plasmids (GAG-POL, REV), Transfer plasmid (カスタム:5'LTR-your choice of Promoter-GOI-3'LTR)
  • 第2世代レンチウイルス(お見積りの際に弊社サービスまでお問合せください): Envelope plasmid (VSV-G pseudotyped), Packaging plasmid (GAG-POL-REV), Transfer plasmid (カスタム:5'LTR-your choice of Promoter-GOI-3'LTR)
  • インテグレース欠損型(IDLV)のレンチウイルスパッケージングも受注しています。お見積り
  • 新製品コロナウイルス Sタンパク質 エンベロープ、Transfer plasmid (EGFP, mCherry など)お見積り
  • 新製品:ネガティブコントロール用 エンベロープタンパク質無しBald(禿げ)レンチウイルス、Transfer plasmid (EGFP, mCherry など)お見積り
価格と出荷までの作業日数
VectorBuilderのレンチウイルスパッケージングサービスは、数々の自社技術改良を経て、業界でもトップ品質の製品を、競合他社に比べて早い納期とリーズナブルな価格で提供しています。 
表1:カスタムウイルス仕様
サイズ 推奨の使用系 タイター*と仕様 価格 (税抜き) 作業日数**
パイロット 培養細胞 >108 TU/ml, 10x25 ul, HBSS buffer 66,000円 8-16 営業日
中容量 培養細胞 >108 TU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 92,000円 8-16 営業日
大容量 培養細胞 >10TU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 144,000円 8-16 営業日
超純粋中容量 培養細胞と in vivo >109 TU/ml, 10x50 ul, HBSS buffer 170,000円 8-16 営業日
超純粋大容量 培養細胞と in vivo >109 TU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 209,000円 8-16 営業日
* ウイルスタイター保証について:VectorBuilderで受託構築したプラスミドベクターからウイルスパッケージングを引き続きご注文いただき、かつパッケージングされるΔ5’ LTR から ΔU3/3’ LTRの長さが9.2 kb以下の場合、タイター保証をご提供しています。
以下の場合、タイター保証は適用外となっています。
  • パッケージング上限サイズを超えた場合(Δ5’ LTR から ΔU3/3’ LTRの長さが9.2 kb以上):上限サイズを超えるとウイルスは不安定となり、パッケージされたDNAフラグメントにリアレンジメントやDNA欠損などが生じることが広く知られています。ウイルス粒子へのパッケージングは可能ですが、搭載した遺伝子の機能欠損やタイターの極端な低下が生じることも知られています。
  • ウイルスベクターに搭載されたORFがパッケージング過程に負の影響を及ぼす場合:細胞毒性を持つ遺伝子(例、プロアポトーシス遺伝子群)、パッケージング細胞やウイルスの生合成に影響を与える遺伝子(例、凝集性を持つ膜タンパク遺伝子)、遺伝子シークエンスが塩基配列のリアレンジメントや二次構造をとるような遺伝子(例、反復配列や高GC-richシークエンス)。
  • ユーザーご提供のプラスミドDNAからウイルスパッケージングを行わせていただく場合:弊社のウイルスパッケージングプロトコールは、弊社で構築したベクターバックボーンに対して最適化されています。また、弊社にシークエンスを公開できないプラスミドDNAや、非定型のレンチウイルス機能シークエンス(例、LTRなど)からのパッケージングには不確定要素が多く、タイター保証のご提供には限界があります。

その他、お見積りの際に弊社よりご連絡させていただいたタイターリスクを、ユーザーにご同意いただき、パッケージングを受注させていただいた場合、できる限り高タイターでの納品を行いますが、生物学的に無理な場合もございます。ご了承ください。パッケージングの進捗に関しては弊社にメールにてお問い合わせください。

** 出荷までの作業日数は、ご注文いただいた受託サービスが弊社で受注され、製造が完了し出荷されるまでの期間です。ユーザーご提供のプラスミドDNAを使っての受託ウイルスパッケージングの場合、プラスミドDNAの受け入れやQCチェックにかかる日数は作業日数に含まれていません。

納品形態

パイロット、中容量、大容量のレンチウイルスパッケージング(培養細胞用)をご注文の場合:

  • カスタムレンチウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • 既製品標準コントロールウイルス*: 無料 仕様は表2をご覧ください。(1または2本のマイクロチューブに分注)
  • 付属品: ポリブレン (5 mg/ml, 200 ul)
  • カルタヘナ法26条1項情報公開書類(メール添付)
  • ウイルス品質試験証明書(COA)

超純粋中容量、または超純粋大容量のレンチウイルスパッケージングをご注文の場合:

  • カスタムレンチウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • 既製品標準コントロールウイルス* : 超純粋グレードを同量、特価で”追加” 注文(オプション)していただけます。10本のマイクロチューブに分注)。 仕様は表2をご覧ください。
  • 付属品: ポリブレン (5 mg/ml, 200 ul)
  • カルタヘナ法26条1項情報公開書類(メール添付)
  • ウイルス品質試験証明書(COA)
 *既製品標準コントロールウイルスとは:カスタムウイルスをご購入いただく場合、 弊社既製品のコントロールウイルスを無料(パイロット、中容量、大容量用)または割引特価(超純粋中容量、超純粋大容量用)でご提供しています。既製品標準コントロールウイルスは、感染効率の最適化などの目的に使用していただけるコントロールウイルスです。ご依頼いただいたカスタムベクターのカスタム空ベクターコントロールやカスタムコントロールではありません。厳密な実験用コントロールウイルスではないことをご了承ください(カスタムコントロールは別途お見積りいたします)。例えば、カスタムウイルスが目的遺伝子の強制発現系であれば、コントロールはEGFPを強制発現するウイルスです。カスタムウイルスがshRNAの発現系では、コントロールはscramble shRNAを発現するウイルスです。
 
表2:既製品標準コントロールウイルス仕様
ベクターシステム 既製品標準コントロールベクター名称 コントロールベクター ID ご注文いただくカスタムウイルスパッケージングサイズ 既製品標準コントロールウイルスの仕様 価格 (税抜き)

レンチウイルス

遺伝子発現システム

pLV[Exp]-EGFP:T2A:
Puro-EF1A>mCherry

VB160109-10005 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS 66,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
レンチウイルス U6プロモーターshRNA ノックダウンシステム

pLV[shRNA]-EGFP:T2A:
Puro-U6>Scramble_shRNA

VB151023-10034 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS 66,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
レンチウイルスmiR30型shRNA ノックダウンシステム

pLV[miR30]-EGFP/Puro-EF1A>mCherry:
Scramble_miR30-shRNA

VB180124-1174nde パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS

66,000円

超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
レンチウイルス CRISPR システム

pLV[Exp]-EGFP:
T2A:Puro-EF1A>mCherry

VB160109-10005 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS 66,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
ウイルス粒子作製、精製、タイター測定

VectorBuilderの第三世代レンチウイルスパッケージングは、産生細胞にプラスミドをトランスフェクションして生産します。

トランスファープラスミド:研究対象遺伝子(Gene of Interest, GOI)を搭載したベクター。VectorBuilderでは、カスタムベクターデザインとベクター構築も費用別で受託しています。

エンべローププラスミド:弊社独自のVSV-G由来のエンベロープをコード

Gag/Pol Revプラスミド:弊社独自デザイン。

短時間のインキュベーション後、in vitro用ウイルスは、上澄みを遠心分離とフィルターを通すことで細胞のデブリを除去し、PEG沈殿によりウイルス粒子を濃縮しています。in vivo用の超純粋グレードのウイルス粒子は、ショ糖クッション遠心分離で純度高く精製されています。

レンチウイルスウイルスタイターは p24 ELISAによって決定します。

タイター測定法についてもっと説明を読む

品質

VectorBuilderで受託製造されたレンチウイルスには、次の品質試験を無料で実施し、ウイルス品質試験証明書(COA)をご提供します。

  • タイター値:p24 ELISA結果。VectorBuilderで受託構築したレンチウイルスベクターからレンチウイルスパッケージングをご注文の場合は、ウイルスタイター保証があります。
  • バイオバーデンテスト:バクテリアや菌類の無菌性結果
  • マイコプラズマテスト:マイコプラスマのコンタミネーション結果
  • 発現テスト:トランスファーベクターに蛍光レポーター遺伝子がクローニングされている場合は、HEK293T細胞にウイルスを感染させ、感染細胞が蛍光を発現していることを確認します。蛍光レポーター遺伝子がクローニングされていない場合は、薬剤耐性によって感染細胞の生存を確認します。
  • 感染細胞の生存テスト:蛍光レポーター遺伝子がクローニングされていない場合は、薬剤耐性によって感染細胞の生存を確認します。

特別な品質検査データが必要な場合は、お見積り時にお問い合わせください。可能な場合、カスタムで品質検査を追加実行し品質検査結果をレポートいたします。service-jp@vectorbuilder.com

ユーザーご提供のトランスファーベクターからのウイルス粒子受託作成について

ユーザーお手持ちのウイルスベクターからウイルス粒子の受託作製も受注しています。 ウイルスベクターは マテリアルサブミッションガイドラインに沿って弊社にお送りください。お受け取りしたプラスミドベクターは、QCチェックとして、ミディプレップ、制限酵素処理によるプラスミドDNAのグローバルマップの確認、サンガーシークエンシングでのシークエンス確認を実施します。QCチェック費用は、プラスミドDNAのサイズが5Kb未満の場合13,000円。5Kb以上の場合19,500円となっています。 QCチェック項目に合格後、ご注文のウイルスパッケージングサービスが開始されます。そのため、ウイルスパッケージングの作業日数には QCチェック日数(通常5営業日)が含まれていません。あらかじめご了承ください。

ご質問

よくあるご質問は Vector FAQ からご覧になれます。弊社からご提供させていただいている受託サービスについて、もっと詳細な情報が必要な場合は、ベクタービルダー・ジャパンのサービスサポートまでお問合せください。