レンチウイルスパッケージング

 レンチウイルスは、哺乳類細胞に遺伝子導入を行う際に、最もよく使われるウイルスベクターの一つです。VectorBuilder は一連の弊社独自のテクノロジーと試薬を開発することで、レンチウイルスのプロトコールを高度に改良しました。VectorBuilder でベクター構築した第3世代レンチウイルスベクターから、ウイルスパッケージングまでの一連をご注文いただく場合、高タイター、高純度、高いウイルスの生存度と均一性の保証をします。ユーザ―満足度の高さは、VectorBuilderのグローバルユーザーの高いリピート率に現れています
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レンチウイルスの種類
  • VSV-G pseudotypeの第2世代 と第3世代のレンチウイルス
  • インテグレース欠損型(IDLV)のレンチウイルスパッケージング
価格と出荷までの作業日数

VectorBuilderのレンチウイルスパッケージングサービスは、数々の自社技術改良を経て、業界でもトップ品質の製品を、競合他社に比べて早い納期とリーズナブルな価格で提供しています。 

サイズ

推奨の使用系 タイター*と仕様 価格 (税抜き) 作業日数**
パイロット 培養細胞 >108 TU/ml, 10x 25 ul, HBSS buffer 64,000円 7-14 日
中容量 培養細胞 >108 TU/ml, 10x 100 ul, HBSS buffer 89,000円 7-14 日
大容量 培養細胞 >10TU/ml, 10x 100 ul, HBSS buffer 139,000円 7-14 日
超純粋中容量 培養細胞と in vivo >109 TU/ml, 10x 50 ul, HBSS buffer 164,000円 7-14 日
超純粋大容量 培養細胞と in vivo >109 TU/ml, 10x 100 ul, HBSS buffer 201,500円 7-14 日

* ウイルスタイター保証について:VectorBuilderで受託構築したウイルスベクターからウイルスパッケージングの受注で、かつパッケージングされる、Δ5’ LTR から ΔU3/3’ LTRの長さが9.2 kb以下の場合、タイター保証をご提供しています。上限サイズを超えるとウイルスは不安定となり、パッケージされたDNAフラグメントにリアレンジメントやDNA欠損などが生じることが広く知られています。上限サイズを超えた場合でもウイルスパッケージングは可能ですが、生成されたウイルス粒子は機能欠失を生じ、タイターの低下が広く知られています。できる限り高タイターでの納品を行いますが、価格表に提示されたタイター保証は適用外とさせていただくことを、ご了承ください。

以下の場合のタイター保証は適用外となっています。ご了承ください: 

  • ウイルスベクターにクローニングされたORFがパッケージング過程に影響を及ぼす可能性がある場合:細胞毒性を持つ遺伝子ORF(例えば、プロアポトーシス遺伝子群)、パッケージング細胞やウイルスの生合成に影響を与える遺伝子ORF(例えば、凝集性を持つ膜タンパク遺伝子)、遺伝子シークエンスが塩基配列のリアレンジメントや二次構造をとるような遺伝子ORF(例えば、反復配列や高GC-richシークエンス);
  • ユーザー提供のウイルスベクターを使うウイルスパッケージングのご注文の場合。弊社のウイルスパッケージングプロトコールは、弊社のベクター構築用のコンポーネントやベクターバックボーンに対して最適化を行っているため、ユーザー提供のウイルスベクターからの高タイターパッケージングには不確定要素が多く、保証には限界があります。

**  出荷までの作業日数は、ご注文いただいた受託サービスが弊社製造ラインで開始し、製造が完了し出荷されるまでの期間です。ユーザー提供のウイルスプラスミドDNAを使っての受託ウイルスパッケージングの場合、プラスミドDNAの受け入れやQCチェックにかかる日数は作業日数に含まれていません。

納品形態

パイロット、中容量、大容量のレンチウイルスパッケージング(培養細胞用)をお選びいただいた場合、次の製品が納品されます:

  • カスタムレンチウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • 無料コントロールウイルス(1または2本のマイクロチューブに分注)
  • 付属品: ポリブレン (5 mg/ml, 200 ul)

超純粋中容量、または超純粋大容量のレンチウイルスパッケージング(in vivo用)をお選びいただいた場合、次の製品が納品されます:

  • カスタムレンチウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • ”追加”注文(オプション)された場合、超純粋コントロールウイルス(カスタムウイルスと同量を低価格でご提供。10本のマイクロチューブに分注)*
  • 付属品: ポリブレン (5 mg/ml, 200 ul)
 * コントロール用に、カスタムウイルスと同一実験系のウイルスベクターをパッケージングしたウイルスをご提供しています。トランスダクション効率を検証するためのコントロールのため、カスタムベクターデザインの実験用コントロールではないことをご了承ください。例えば、カスタムウイルスが、GOIの強制発現であれば、コントロールはEGFPを強制発現するウイルスとなっています。カスタムウイルスがGOIのshRNAを発現する場合は、コントロールはscramble shRNAを発現するウイルスとなっています。コントロールウイルスの詳細は下の表をご確認ください:
ベクターシステム コントロールベクター名称 コントロールベクター ID カスタムウイルスパッケージングサイズ コントロールウイルスの仕様 価格 (税抜き)

レンチウイルス

遺伝子発現システム

pLV[Exp]-EGFP:T2A:
Puro-EF1A>mCherry

VB160109-10005 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x 50 ul in HBSS 50,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x 100 ul in HBSS 62,500円
レンチウイルス U6プロモーターshRNA ノックダウンシステム

pLV[shRNA]-EGFP:T2A:
Puro-U6>Scramble_shRNA

VB151023-10034 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x 50 ul in HBSS 50,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x 100 ul in HBSS 62,500円
レンチウイルスmiR30型shRNA ノックダウンシステム

pLV[miR30]-EGFP/Puro-EF1A>mCherry:
Scramble_miR30-shRNA

VB180124-1174nde パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x 50 ul in HBSS

50,000円

超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x 100 ul in HBSS 62,500円
レンチウイルス CRISPR システム

pLV[Exp]-EGFP:
T2A:Puro-EF1A>mCherry

VB160109-10005 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x 100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x 50 ul in HBSS 50,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x 100 ul in HBSS 62,500円
ウイルス粒子作製、精製、タイター測定

VectorBuilderの第三世代レンチウイルスパッケージングは、研究対象遺伝子(Gene of Interest, GOI)をクローニングしたトランスファープラスミドをVectorBuilderのVSV-Gエンべローププラスミド、Gag/PolとRevをコードするプラスミドとともにパッケージング細胞に導入します。 短時間のインキュベーション後、上澄みを遠心分離とフィルターを通すことで細胞のデブリを除去し、PEG沈殿によりウイルス粒子を濃縮しています。超純粋(in vivo)グレードのウイルス粒子は、ショ糖クッション遠心分離で純度高く精製されています。レンチウイルスウイルスタイターは p24 ELISAによって求めています。

タイター測定法についてもっと説明を読む

品質管理

VectorBuilderで受託製造されたレンチウイルスには、タイター測定値、バクテリアや菌類の滅菌性の検査、マイコプラズマのコンタミ検査の品質テスト結果をお付けしています。

VectorBuilderに受託構築依頼されたウイルスベクターからウイルス粒子を作成する場合は、タイター保障をお付けしています。また、ベクターに蛍光タンパク質のコーディングが入っている場合は、HEK293T細胞にウイルスを感染させ、細胞が蛍光を発現していることも確認します。さらに、超純粋レンチウイルスパッケージングの場合は、エンドトキシンアッセイの検査結果もお付けしています。

特別な品質検査データが必要な場合は、お見積り時にお問い合わせください。可能な場合、カスタムで品質検査を追加実行し品質検査データをレポートいたします。service-jp@vectorbuilder.com

ユーザーご提供のトランスファーベクターからのウイルス粒子受託作成について

ユーザーお手持ちのウイルスベクターからウイルス粒子の受託作製も受注しています。 ウイルスベクターは マテリアルサブミッションガイドラインに沿って弊社にお送りください。お受け取りしたプラスミドベクターは、QCチェックとして、マキシプレップ、プラスミドの制限酵素サイトの確認と、サンガーシークエンシングでのシークエンスの確認を行います。一律12500円のQCチェック費用をお見積りに加算させていただいています。 QCチェックに合格後、ご注文のウイルスパッケージングサービスを行います。ウイルスパッケージングのお見積りの作業日数には QCチェックにかかる日数(通常5営業日)は含まれていません。あらかじめご了承ください。

ご質問

よくあるご質問は Vector FAQ からご覧になれます。弊社からご提供させていただいている受託サービスについて、もっと詳細な情報が必要な場合は、ベクタービルダー・ジャパンのサービスサポートまでお問合せください。

マイベクターをデザインする 

オンラインポータルを使って、自分でベクターデザインを行い、そのベクターの見積もりを依頼する場合。

デザインリクエストを送る 

ベクタービルダーにベクターデザインと見積もりの両方を依頼する場合。その他のカスタム受託サービスのお見積りもここからお問い合わせください。