レンチウイルスパッケージング

 レンチウイルスは、哺乳類細胞に遺伝子導入を行う際に、最もよく使われるウイルスベクターの一つです。VectorBuilder は独自に開発した技術と試薬を用いて、レンチウイルスパッケージングのプロトコールを常に改良しています。VectorBuilder でベクター構築した第3世代レンチウイルスベクターから、ウイルスパッケージングまでの一連をご注文いただく場合、高タイター、高純度、高いウイルスの生存度と均一性の保証をご提供しています。ユーザ―満足度の高さは、VectorBuilderのグローバルユーザーの高いリピート率に現れています。
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レンチウイルスパッケージングサービスのご注文方法

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レンチウイルスの種類
  • 第3世代レンチウイルス(デフォルトご注文): Envelope plasmid (VSV-G pseudotyped), Packaging plasmids (GAG-POL, REV), Transfer plasmid (カスタム:5'LTR-your choice of Promoter-GOI-3'LTR)
  • 第2世代レンチウイルス(お見積りの際に弊社サービスまでお問合せください): Envelope plasmid (VSV-G pseudotyped), Packaging plasmid (GAG-POL-REV), Transfer plasmid (カスタム:5'LTR-your choice of Promoter-GOI-3'LTR)
  • インテグレース欠損型(IDLV)のレンチウイルスパッケージングも受注しています。お見積り
  • 新製品コロナウイルス Sタンパク質 エンベロープ、Transfer plasmid (EGFP, mCherry など)お見積り
  • 新製品:ネガティブコントロール用 ΔS, ΔGエンベロープ、Transfer plasmid (EGFP, mCherry など)お見積り
価格と出荷までの作業日数
VectorBuilderのレンチウイルスパッケージングサービスは、数々の自社技術改良を経て、業界でもトップ品質の製品を、競合他社に比べて早い納期とリーズナブルな価格で提供しています。 
表1:カスタムウイルス仕様
サイズ 推奨の使用系 タイター*と仕様 価格 (税抜き) 作業日数**
パイロット 培養細胞 >108 TU/ml, 10x25 ul, HBSS buffer 66,000円 8-16 営業日
中容量 培養細胞 >108 TU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 92,000円 8-16 営業日
大容量 培養細胞 >10TU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 144,000円 8-16 営業日
超純粋中容量 培養細胞と in vivo >109 TU/ml, 10x50 ul, HBSS buffer 170,000円 8-16 営業日
超純粋大容量 培養細胞と in vivo >109 TU/ml, 10x100 ul, HBSS buffer 209,000円 8-16 営業日
* ウイルスタイター保証について:VectorBuilderで受託構築したプラスミドベクターからウイルスパッケージングを引き続きご注文いただき、かつパッケージングされるΔ5’ LTR から ΔU3/3’ LTRの長さが9.2 kb以下の場合、タイター保証をご提供しています。
以下の場合、タイター保証は適用外となっています。
  • パッケージング上限サイズを超えた場合(Δ5’ LTR から ΔU3/3’ LTRの長さが9.2 kb以上):上限サイズを超えるとウイルスは不安定となり、パッケージされたDNAフラグメントにリアレンジメントやDNA欠損などが生じることが広く知られています。ウイルス粒子へのパッケージングは可能ですが、搭載した遺伝子の機能欠損やタイターの極端な低下が生じることも知られています。
  • ウイルスベクターに搭載されたORFがパッケージング過程に負の影響を及ぼす場合:細胞毒性を持つ遺伝子(例、プロアポトーシス遺伝子群)、パッケージング細胞やウイルスの生合成に影響を与える遺伝子(例、凝集性を持つ膜タンパク遺伝子)、遺伝子シークエンスが塩基配列のリアレンジメントや二次構造をとるような遺伝子(例、反復配列や高GC-richシークエンス)。
  • ユーザーご提供のプラスミドDNAからウイルスパッケージングを行わせていただく場合:弊社のウイルスパッケージングプロトコールは、弊社で構築したベクターバックボーンに対して最適化されています。また、弊社にシークエンスを公開できないプラスミドDNAや、非定型のレンチウイルス機能シークエンス(例、LTRなど)からのパッケージングには不確定要素が多く、タイター保証のご提供には限界があります。

その他、お見積りの際に弊社よりご連絡させていただいたタイターリスクを、ユーザーにご同意いただき、パッケージングを受注させていただいた場合、できる限り高タイターでの納品を行いますが、生物学的に無理な場合もございます。ご了承ください。パッケージングの進捗に関しては弊社にメールにてお問い合わせください。

** 出荷までの作業日数は、ご注文いただいた受託サービスが弊社で受注され、製造が完了し出荷されるまでの期間です。ユーザーご提供のプラスミドDNAを使っての受託ウイルスパッケージングの場合、プラスミドDNAの受け入れやQCチェックにかかる日数は作業日数に含まれていません。

納品形態

パイロット、中容量、大容量のレンチウイルスパッケージング(培養細胞用)をご注文の場合:

  • カスタムレンチウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • 無料コントロールウイルス(1または2本のマイクロチューブに分注)
  • 付属品: ポリブレン (5 mg/ml, 200 ul)
  • カルタヘナ法26条1項情報公開書類(メール添付)
  • ウイルス品質試験証明書(COA)

超純粋中容量、または超純粋大容量のレンチウイルスパッケージングをご注文の場合:

  • カスタムレンチウイルス(10本のマイクロチューブに分注)
  • ”追加”注文(オプション)された場合、超純粋コントロールウイルス(カスタムウイルスと同量を特別価格でご提供。10本のマイクロチューブに分注)* (表2参照)
  • 付属品: ポリブレン (5 mg/ml, 200 ul)
  • カルタヘナ法26条1項情報公開書類(メール添付)
  • ウイルス品質試験証明書(COA)
 * コントロール用に、カスタムウイルスと同一実験系のウイルスベクターをパッケージングしたウイルスをご提供しています。トランスダクション効率を検証するためのコントロールのため、カスタムベクターデザインの実験用コントロールではないことをご了承ください。例えば、カスタムウイルスが、GOIの強制発現であれば、コントロールはEGFPを強制発現するウイルスとなっています。カスタムウイルスがGOIのshRNAを発現する場合は、コントロールはscramble shRNAを発現するウイルスとなっています。コントロールウイルスの詳細は表2をご確認ください。
表2:コントロールウイルス仕様
ベクターシステム コントロールベクター名称 コントロールベクター ID カスタムウイルスパッケージングサイズ コントロールウイルスの仕様 価格 (税抜き)

レンチウイルス

遺伝子発現システム

pLV[Exp]-EGFP:T2A:
Puro-EF1A>mCherry

VB160109-10005 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS 66,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
レンチウイルス U6プロモーターshRNA ノックダウンシステム

pLV[shRNA]-EGFP:T2A:
Puro-U6>Scramble_shRNA

VB151023-10034 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS 66,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
レンチウイルスmiR30型shRNA ノックダウンシステム

pLV[miR30]-EGFP/Puro-EF1A>mCherry:
Scramble_miR30-shRNA

VB180124-1174nde パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS

66,000円

超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
レンチウイルス CRISPR システム

pLV[Exp]-EGFP:
T2A:Puro-EF1A>mCherry

VB160109-10005 パイロット >108 TU/ml, 100 ul in HBSS 無料
中容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
大容量 >108 TU/ml, 2x100 ul in HBSS 無料
超純粋中容量 >109 TU/ml, 10x50 ul in HBSS 66,000円
超純粋大容量 >109 TU/ml, 10x100 ul in HBSS 79,000円
ウイルス粒子作製、精製、タイター測定

VectorBuilderの第三世代レンチウイルスパッケージングは、産生細胞にプラスミドをトランスフェクションして生産します。

トランスファープラスミド:研究対象遺伝子(Gene of Interest, GOI)を搭載したベクター。VectorBuilderでは、カスタムベクターデザインとベクター構築も費用別で受託しています。

エンべローププラスミド:弊社独自のVSV-G由来のエンベロープをコード

Gag/Pol Revプラスミド:弊社独自デザイン。

短時間のインキュベーション後、in vitro用ウイルスは、上澄みを遠心分離とフィルターを通すことで細胞のデブリを除去し、PEG沈殿によりウイルス粒子を濃縮しています。in vivo用の超純粋グレードのウイルス粒子は、ショ糖クッション遠心分離で純度高く精製されています。

レンチウイルスウイルスタイターは p24 ELISAによって決定します。

タイター測定法についてもっと説明を読む

品質

VectorBuilderで受託製造されたレンチウイルスには、次の品質試験を無料で実施し、ウイルス品質試験証明書(COA)をご提供します。

  • タイター値:p24 ELISA結果。VectorBuilderで受託構築したレンチウイルスベクターからレンチウイルスパッケージングをご注文の場合は、ウイルスタイター保証があります。
  • バイオバーデンテスト:バクテリアや菌類の無菌性結果
  • マイコプラズマテスト:マイコプラスマのコンタミネーション結果
  • 発現テスト:トランスファーベクターに蛍光タンパク質がクローニングされている場合は、HEK293T細胞にウイルスを感染させ、感染細胞が蛍光を発現していることを確認します。
  • エンドトキシン値:超純粋レンチウイルスパッケージングの場合、エンドトキシンアッセイの検査結果をお付けします。

特別な品質検査データが必要な場合は、お見積り時にお問い合わせください。可能な場合、カスタムで品質検査を追加実行し品質検査結果をレポートいたします。service-jp@vectorbuilder.com

ユーザーご提供のトランスファーベクターからのウイルス粒子受託作成について

ユーザーお手持ちのウイルスベクターからウイルス粒子の受託作製も受注しています。 ウイルスベクターは マテリアルサブミッションガイドラインに沿って弊社にお送りください。お受け取りしたプラスミドベクターは、QCチェックとして、マキシプレップ、プラスミドの制限酵素サイトの確認と、サンガーシークエンシングでのシークエンスの確認を行います。一律13,000円のQCチェック費用をお見積りに加算させていただいています。 QCチェックに合格後、ご注文のウイルスパッケージングサービスを行います。ウイルスパッケージングのお見積りの作業日数には QCチェックにかかる日数(通常5営業日)は含まれていません。あらかじめご了承ください。

ご質問

よくあるご質問は Vector FAQ からご覧になれます。弊社からご提供させていただいている受託サービスについて、もっと詳細な情報が必要な場合は、ベクタービルダー・ジャパンのサービスサポートまでお問合せください。

マイベクターをデザインする 

オンラインポータルを使って、自分でベクターデザインを行い、そのベクターの見積もりを依頼する場合。

デザインリクエストを送る 

ベクタービルダーにベクターデザインと見積もりの両方を依頼する場合。その他のカスタム受託サービスのお見積りもここからお問い合わせください。