誘導性遺伝子発現ソリューションズ

カスタムTetベクター

VectorBuilderは、テトラサイクリン誘導性遺伝子発現カセットを標的細胞に効率的にデリバリーするカスタムベクター構築サービスを提供します。当社のオンライン上で公開されている非常に直感的に使いこなせるベクターデザインプラットフォームを使用し、カスタムベクターをデザインします。幅広いベクターバックボーン（非ウイルス、ウイルス、またはトランスポゾン）のコレクションとベクターコンポーネント（プロモーター、ORF、蛍光および薬物選択マーカー）を、ほぼ無制限に組み合わせて、目的遺伝子発現をTetで調節する独自のベクターデザインと受託構築サービスの発注が可能です。

カスタムTetベクター構築サービスをショッピングカートに入れると、関連サービスとして、プラスミドDNAの増幅と精製、ウイルスパッケージングサービスの追加注文を行えます。

ポピュラーTetベクター

VectorBuilderは、オールインワンベクター形式またはデュアルベクター形式のTetベクターのパネルを提供します。Tetベクター構築サービスをショッピングカートに入れると、関連サービスとして、プラスミドDNAの増幅と精製、ウイルスパッケージングサービスの追加注文を行えます。

ベクターピッカーをつかってポピュラーTetベクターを発注する

オールインワン(Tet-on)

注:  オールインワン(Tet-on)レンチウイルスベクターに関するご依頼は デザインサポートを依頼する からお問い合せください。

TRE駆動型GOI発現

Tet調節タンパク質発現

ベクターピッカーから目的のTetベクターが見つからない場合は、必要なコンポーネントや実験目的を デザインリクエスト  から送ってください。当社のデザイン担当者が目的に合ったベクターをデザインします。

Tetベクターのウイルスパッケージング

VectorBuilderは、トランスフェクションが困難な細胞にTet誘導性遺伝子発現システムをデリバリーする、レンチウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、およびアデノウイルスの高品質のウイルスパッケージングを受託作製いたします。当社独自の技術と試薬により、タイター、純度、生存率、コンシステンシーの点でウイルスパッケージングプロトコルが大幅に改善しました。当社のウイルスパッケージングプロトコルは弊社が作製するベクターに最適化されています。

ウイルスパッケージングサービスの詳細を読む

テトラサイクリン誘導性遺伝子発現

テトラサイクリン誘導性遺伝子発現システムは、哺乳類細胞における遺伝子発現のタイミングを制御するための強力なツールです（図1）。VectorBuilderでは、Tet-OnシステムとTet-Offシステムの両方のカスタムベクター構築サービスを提供しています。非常に特異的に、かつテトラサイクリン用量依存的に、目的遺伝子の発現調節が可能です。  

ベクタービルダーのTet-Onベクターシステムは、テトラサイクリンの非存在下でGOIのほぼ完全なサイレンシングを担い、テトラサイクリンが添加されると、濃度依存的に応答し、強力で迅速なGOIの発現を誘導します。この分子メカニズムには、互いに転写調節機能に拮抗するtTSタンパク質とrtTAタンパク質をベクターシステムに組み込むことで実現されています。テトラサイクリンが非存在下では、TetR（Tetリプレッサータンパク質）とKRAB-AB（Kid-1タンパク質の転写リプレッサードメイン）融合タンパク質であるtTSタンパク質が、TREプロモーターに結合し、遺伝子転写の積極的なサイレンシングを行っています。一方、rTetR（変異型Tetリプレッサー）とVP16（単純ヘルペスウイルスのビリオンタンパク質16の転写活性化ドメイン）の融合タンパク質でるrtTAタンパク質が、テトラサイクリンの存在下でTREプロモーターに結合すると、遺伝子転写を強力に誘導します。

図1. Tet-OnとTet-Offシステムを使用したTet調節遺伝子発現のメカニズム。Dox: ドキシサイクリン (doxycycline, テトラサイクリンアナログ)

Tet誘導性遺伝子発現システムは、以下の表に要約されているような、他のシステムに比べた利点があります。そのため他の誘導性遺伝子発現システムに比べてよく使用されます:

オールインワン(All-in-one)ベクターデザイン対デュアル(dual)ベクターデザイン

テトラサイクリンによって調節されるGOI発現誘導または阻害には、標的細胞にてTREプロモーターとTet調節タンパク質（tTA、tTS、および/またはrtTA）によって駆動されるGOIが同時発現することが必要です。そのためには、GOIとTetの両方の調節タンパク質を同じベクター（別名オールインワンベクター）から発現させるか、またはGOIとTetの調節タンパク質を別々のベクター（デュアルベクター）から発現させる方法があります。オールインワンベクターの利点は、1ベクターでTet調節遺伝子発現に必要なすべてのコンポーネントを細胞にデリバリーできるため、技術的に容易なことです。デュアルベクターでは2つの別々のプラスミド/ウイルスによる標的細胞の同時トランスフェクション/同時形質導入が必要です。全ての細胞が両方のプラスミド/ウイルスでトランスフェクト/形質導入されるわけではないため、技術的にチャレンジングな場合もあります。デュアルベクターの代替アプローチとしては、Tet調節タンパク質を安定して発現する細胞または生物に、GOIプラスミド/ウイルスをトランスフェクト/形質導入することです。ただし、この方法は細胞や動物の確立に時間と労力を要します。このようにネガティブな印象のあるデュアルベクターシステムですが、すでにTet調節タンパク質を安定発現する細胞や動物を確立してしまえば、複数の異なるGOI発現プラスミド/ウイルスを均一の条件下で発現できるため、よい比較実験系が組める利点が好まれています。