昆虫細胞タンパク質発現システム

価格と作業日数  プライスマッチ 

* 精製方法は、発現ベクターのデザインとタンパク質の特性に基づいて決定されます。 

納品と保存方法

ベクター作製サービスのデフォルトの納品物は 1‐2ugのプラスミドDNAです。ご要望があれば、大腸菌グリセロールストックをご提供することも可能です。当社の組換えタンパク質のほとんどは凍結状態のドライアイス便で納品されます。納品後は、無菌状態で-20℃～-80℃で保存してください。組換えタンパク質は、適切に保存されれば、通常1年間は安定した状態を保ちます。組換えタンパク質が納品されたら、分注を行い、凍結融解サイクルを避けることをお勧めします。

品質管理（QC）

ベクタービルダーによってクローニングされたベクターはすべて100%の配列保証がなされます ベクタービルダーの組換えタンパク質は、厳格な品質管理を受けながら生産されます。ほとんどの発現システムの標準QCには、1) 制限酵素切断解析とサンガーシークエンスによるタンパク質発現ベクターの検証、2) A260/280測定とSDS-PAGEによるタンパク質濃度と純度の決定が含まれます。以下の表に示されている一般的な追加QCサービスは、ご要望に応じて提供可能です。

ベクターシステム

昆虫細胞システムで組換えタンパク質を発現させるために、目的遺伝子（GOI）をベクタービルダーのpBVベクターの強力なプロモーター下流にクローニングします。この発現カセット全体は、Tn7トランスポゾンターミナルエレメントであるTn7LとTn7Rのあいだに配置されています。このベクターを、bacmidシャトルベクターとヘルパープラスミドを持つ大腸菌に形質転換します。bacmidはlacZ遺伝子とlacZコード領域に挿入されたattTn7ドッキングサイトを持つように改変されたバキュロウイルスのゲノムを含む非常に大きなプラスミドです。ヘルパープラスミドはTn7トランスポザーゼを発現します。Tn7トランスポザーゼは、GOIと薬剤耐性遺伝子の発現カセットを含むpBVベクター上のTn7RとTn7Lに挟まれた領域を、bacmidのattTn7ドッキング部位に転移させます。組換えbacmidが導入されたコロニーは、薬剤選択と青／白スクリーニングによって同定されます（非組換えコロニーはlacZ発現により青色、組換えコロニーはトランスポゾン挿入によるlacZの破壊により白色を示す）。精製したbacmid DNAを昆虫細胞にトランスフェクションして、生きたバキュロウイルス(P1)を作製します。P1バキュロウイルスを昆虫細胞で適当なタイターになるまで増幅後に、昆虫細胞に感染させて目的の組換えタンパク質を産生させます。

ベクタービルダーのバキュロウイルスタンパク質発現ベクターシステムの詳細については、ベクターガイドをご覧ください。

図1. バキュロウイルス-昆虫組換えタンパク質発現ベクターマップ。

ケーススタディ

図2. 昆虫細胞で生産された組換えタンパク質の特性解析。(A）SDS-PAGE分析により、組換えタンパク質の分子量と95%以上の純度を確認した。(B）SEC-HPLCにより95％以上の純度が再確認された。(C）組換えタンパク質の生物学的活性を細胞増殖アッセイで測定した。ED50は2〜11ng/ml。