プラスミドDNA精製受託サービス
高品質のプラスミドDNAはクローニング、トランスフェクション/トランスフォーメーション、ウイルスパッケージング、タンパク質生産など、様々な分子生物学的手法に不可欠です。VectorBuilderのプラスミドDNA精製サービスは高品質のプラスミドDNAをご希望の量で迅速かつ省コストでお届けします。当社が提供するプラスミドDNAの製造スケールは ug から g 単位まで、基礎研究や製薬産業界の顧客ニーズを満たします。リサーチグレードのプラスミド、リサーチプラスグレード、産業用グレードのプラスミドに加え、臨床応用のためのGMPおよびGMP-likeグレードのプラスミド製造も提供しています。
さらに、抗生物質/添加物を不要にし、安全性プロファイル、製造（生産）性、効率をより優れたものに改良した当社独自のminiVec™プラスミドをご覧ください。
特長
リサーチグレード
- クローニングや様々な分子生物学的実験に
- 早い納期で高いコストパフォーマンス
リサーチプラスグレード
- 細胞へのトランスフェクション、ウイルスパッケージング、タンパク質発現やin vivo解析に
- 100 ugから10 mgのスケールに対応
- 高いスーパーコイル比(80±10%)と低いエンドトキシンレベル(<0.05 EU/ug)
産業用グレード
- 前臨床試験や試料の大規模生産用に
- 顧客ごとに必要な製造スケール(100 ugから1 g) およびQCアッセイを設定
- さらに高いスーパーコイル比 (≥85%) と低いエンドトキシンレベル (<0.01 EU/ug)
- 生物由来成分不使用（Animal-free production）にも対応
ご希望のスケール（質と量）を早い納期で
サービスの詳細
価格と作業日数
| グレード | スケール | 回収率 | 価格 (税・送料別) | 作業日数 | 用途 |
|---|---|---|---|---|---|
| リサーチ | ミニ(Mini) | 高コピー: >10ug (>200 ng/ul, 50 ul) | 6,500円 | 1-2 日 | クローニングおよび様々な分子生物学実験 |
| 中/低コピー: >5 ug (>100 ng/ul, 50 ul) | |||||
| リサーチプラス | ミディ(Midi) | 高コピー: >100 ug (>1 ug/ul, 100 ul) | 15,500円 | 2-4 日 | 様々な細胞培養 (例：トランスフェクション、ウイルスパッケージング、タンパク質発現、in vitroアッセイ)およびin vivo実験 |
| 中/低コピー >50 ug (>500 ng/ul, 100 ul) | |||||
| マキシ(Maxi) | 高コピー: >300 ug (>1 ug/ul, 300 ul) | 23,500円 | |||
| 中/低コピー: >150 ug (>500 ng/ul, 300 ul) | |||||
| メガ(Mega) | 高コピー: >1 mg (>1 ug/ul, 1 ml) | 39,000円 | |||
| 中/低コピー: >0.5 mg (>500 ng/ul, 1 ml) | |||||
| ギガ(Giga) | 高コピー: >10 mg (>1 ug/ul, 10 ml) | 124,000円 | 5-7 日 | ||
| 中/低コピー: >5 mg (>500 ng/ul, 10 ml) | |||||
| 産業用 | 100 ug ~ 1 g | お問い合わせください | 前臨床試験（例：効率や安全性試験）および産業用組み換えタンパク質、ウイルス、IVT RNAの大量生産 | ||
生物由来成分を使用しないプラスミドDNA精製サービス(生物由来原料基準：生原基準に合致）
生物由来原料を全く使わない方法を採用したDNA精製サービスをご提供しています。本サービスで精製されたプラスミドは、ウシ海綿状脳症（bovine spongiform encephalopathy：BSE) を含む伝染性海綿状脳症（spongiform encephalopathies：TSE）の危険性がありません。植物由来のトリプトンを使用し、DNA精製過程で酵素反応を用いずに行っています。本サービスを利用したプラスミドDNAには、TSE/BSEの無コンタミネーションを証明する品質証明書を発行いたします。お見積りは デザインサポートを依頼するからご依頼ください。
出荷形態と保存方法
当社のプラスミドDNA製品は1x TEバッファーで保存され、常温にて輸送されます。プラスミドDNAは短期間（≤2週間）4°で保存が可能です。長期保存には、-20°Cまたは -80°Cで保存してください。凍結融解の繰り返しはお避け下さい。
ユーザーご提供プラスミドDNAを使用して受託するDNA精製サービス
VectorBuilderではユーザー所有のプラスミドDNAをご送付いただき、プラスミドDNA精製サービスをご利用いただくこともできます。お見積り作成時にご提供いただくプラスミドの情報を予め"サポート" > "マテリアルをサブミットする"からマテリアルサブミッションガイドラインに従って情報の提供と送付準備をお願いいたします。レターパック宅配便などの追跡番号、注文番号、ユーザー名、マテリアル名称と数量など、必要な情報を漏れなくご入力いただくようお願いいたします。追跡番号と受託サービスの注文番号に記入漏れがあると、弊社内での連携したマテリアルのお受け取りができず、マテリアルが輸送中にダメージが生じたり、受託プロジェクトの開始が遅れる可能性があります。ユーザー提供のプラスミドDNAのQCはVectorBuilderの製造拠点に到着後、事前にご提出いただいたシークエンスデータを元に実施いたします。QC作業には一点あたり追加費用8,000~24,000円（税抜き）と追加作業日数約5~7日間を予めご了承いただいております。 ユーザーご提供のマテリアルがQCにパスした後に、受託プロジェクトが正式に開始されます。 ご不明な点がございましたら、こちらまでお問い合わせください。
技術情報
品質検査
| 項目 | QC試験 | リサーチグレード | リサーチプラス | 産業用グレード | |
|---|---|---|---|---|---|
| 一般/物理的特性 | 外観 | 目視確認 | ✓ | ✓ | ✓ |
| 濃度 | Nanodrop | ✓ | ✓ | ✓ | |
| 特異性 | プラスミドサイズ | 制限酵素処理 | ✓ | ✓ | ✓ |
| 挿入配列 | サンガーシークエンス | オプション | オプション | オプション | |
| 全長プラスミドシークエンス | サンガーシークエンス | オプション | オプション | オプション | |
| NGS | オプション | オプション | オプション | ||
| 第3世代シークエンス | オプション | オプション | オプション | ||
| 純度 | OD260/280 | Nanodrop | ✓ | ✓ | ✓ |
| スーパーコイルプラスミド比率 | アガロースゲル電気泳動 | N/A | ✓ 80 ± 10% |
✓ ≥85% |
|
| 残留タンパク質 | BCA | N/A | N/A | オプション | |
| 宿主大腸菌RNA | アガロースゲル電気泳動検出限界 | N/A | ✓ | ✓ | |
| 蛍光定量 | N/A | N/A | オプション | ||
| 宿主大腸菌 DNA | アガロースゲル電気泳動 | N/A | ✓ | ✓ | |
| qPCR | N/A | N/A | オプション | ||
| 安全性 | 無菌性 | 直接接種 | N/A | ✓ | ✓ |
| エンドトキシン濃度 | キネティッククロモジェニックアッセイ(KCA) | N/A | ✓ <0.05 EU/ug |
✓ <0.01 EU/ug |
|
| ファージ検出 | PCR | N/A | ギガプレップのみ実施 | ✓ (スケールが >10 mg) | |
| 交付書類 | - | - | COA (要望があった場合) | COA (要望があった場合) |
1. COA
2. TSE/BSE statement (要望があった場合)
|
ご注文方法
リソース
注目の引用論文
Lactic acid promotes PD-1 expression in regulatory T cells in highly glycolytic tumor microenvironments
Cancer Cell, 2022, doi: 10.1016/j.ccell.2022.01.001
使用された製品/サービス：
- プラスミドDNA精製
Abstract: The balance of programmed death-1 (PD-1)-expressing CD8+ T cells and regulatory T (Treg) cells in the tumor microenvironment (TME) determines the clinical efficacy of PD-1 blockade therapy through the competition of their reactivation. However, factors that determine this balance remain unknown. Here, we show that Treg cells gain higher PD-1 expression than effector T cells in highly glycolytic tumors, including MYC-amplified tumors and liver tumors. Under low-glucose environments via glucose consumption by tumor cells, Treg cells actively absorbed lactic acid (LA) through monocarboxylate transporter 1 (MCT1), promoting NFAT1 translocation into the nucleus, thereby enhancing the expression of PD-1, whereas PD-1 expression by effector T cells was dampened. PD-1 blockade invigorated the PD-1-expressing Treg cells, resulting in treatment failure. We propose that LA in the highly glycolytic TME is an active checkpoint for the function of Treg cells in the TME via upregulation of PD-1 expression.
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Glycine decarboxylase maintains mitochondrial protein lipoylation to support tumor growth
Dzmitry Mukha, et al.
Cell Metabolism, 2022, doi: 10.1016/j.cmet.2022.04.006
使用された製品/サービス：
- プラスミドDNA精製
Abstract: The folic acid cycle mediates the transfer of one-carbon (1C) units to support nucleotide biosynthesis. While the importance of serine as a mitochondrial and cytosolic donor of folate-mediated 1C units in cancer cells has been thoroughly investigated, a potential role of glycine oxidation remains unclear. We developed an approach for quantifying mitochondrial glycine cleavage system (GCS) flux by combining stable and radioactive isotope tracing with computational flux decomposition. We find high GCS flux in hepatocellular carcinoma (HCC), supporting nucleotide biosynthesis. Surprisingly, other than supplying 1C units, we found that GCS is important for maintaining protein lipoylation and mitochondrial activity. Genetic silencing of glycine decarboxylase inhibits the lipoylation and activity of pyruvate dehydrogenase and impairs tumor growth, suggesting a novel drug target for HCC. Considering the physiological role of liver glycine cleavage, our results support the notion that tissue of origin plays an important role in tumor-specific metabolic rewiring.
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Dominant mutations in MIEF1 affect mitochondrial dynamics and cause a singular late onset optic neuropathy
Majida Charif, et al.
Molecular Neurodegeneration, 2021, doi: 10.1186/s13024-021-00431-w
使用された製品/サービス：
- プラスミドDNA精製
Abstract: Inherited optic neuropathies are the most common mitochondrial diseases, leading to neurodegeneration involving the irreversible loss of retinal ganglion cells, optic nerve degeneration and central visual loss. Importantly, properly regulated mitochondrial dynamics are critical for maintaining cellular homeostasis, and are further regulated by MIEF1 (mitochondrial elongation factor 1) which encodes for MID51 (mitochondrial dynamics protein 51), an outer mitochondrial membrane protein that acts as an adaptor protein to regulate mitochondrial fission. However, dominant mutations in MIEF1 have not been previously linked to any human disease. Using targeted sequencing of genes involved in mitochondrial dynamics, we report the first heterozygous variants in MIEF1 linked to disease, which cause an unusual form of late-onset progressive optic neuropathy characterized by the initial loss of peripheral visual fields. Pathogenic MIEF1 variants linked to optic neuropathy do not disrupt MID51's localization to the outer mitochondrial membrane or its oligomerization, but rather, significantly disrupt mitochondrial network dynamics compared to wild-type MID51 in high spatial and temporal resolution confocal microscopy live imaging studies. Together, our study identifies dominant MIEF1 mutations as a cause for optic neuropathy and further highlights the important role of properly regulated mitochondrial dynamics in neurodegeneration.
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