VectorBuilderにおけるウイルスタイターの計測法は？
ウイルスベクターが蛍光レポーター遺伝子をもつ場合、ウイルス粒子の精製後、まず始めに293Tや293Aなど一般的な細胞にウイルスを導入して蛍光タンパク質の発現を観察することで品質を確認します。ウイルスのタイプに応じて様々な方法でタイターを定量します。蛍光の観察と定量性検査の結果が一致しない場合は再検査と追加の検証を行うことで、当社のウイルスが高品質であることを確認します。
レンチウイルス
当社は、レンチウイルスのタイター測定にp24 ELISA（サンドイッチ法）を使用しています。上清中のレンチウイルスのHIV-1 p24コアタンパク質の濃度を測定する免疫アッセイです。まず、抗HIV-1 p24抗体で予めコーティングしたマイクロタイタープレートにレンチウイルスサンプルを添加し、サンプル中のp24を結合させます。次に、ビオチン標識抗p24二次抗体を添加し、プレート上で最初の抗体によって捕捉されたp24に結合させます。その後、ストレプトアビジン-HRPコンジュゲートを添加し、ストレプトアビジンをビオチン標識抗p24抗体に結合させます。最後に、基質溶液を添加することでHRPと反応させ、発色します。色の強度は、各レンチウイルスサンプル中のp24の量に比例し、分光光度計で測定し、組換えHIV-1 p24標準曲線と比較することで正確に定量化されます。p24値は、対応するレンチウイルスサンプルのウイルスタイターと相関関係にあります。
アデノウイルス
当社はアデノウイルスでも感染能力をあるタイターを測定しています。段階希釈したアデノウイルスをHEK293細胞に感染させた後、形質転換してアデノウイルス由来のヘクソン（hexon ）タンパク質を発現している細胞の数を免疫細胞染色によって調べます。細胞への感染は多重感染度が非常に低い条件でおこなわれているので、各々の形質転換細胞は一つのウイルス粒子によって感染されていると保証できます。この方法は従来のプラークアッセイの結果と良い相関性を示します。感染能を持つタイターと超高純度のアデノウイルスの光学濃度の間には高い相関があるので、高純度のアデノウイルスのタイターの検定には光学濃度（DO260）を測定します。レンチウイルスとは違い、アデノウイルスは非常に安定しています。長期間室温で保存された後でも、当社で作製したウイルス粒子は基本的にすべて生存して感染能を保持しています。
アデノ随伴ウイルス(AAV)
AAVの物理的タイターは溶解したウイルスからウイルスゲノムを抽出し、qPCRを使ってウイルスゲノムのコピー数（ITR領域のコピー数を代用）を正確に計測します。レンチウイルスとは違い、AVVウイルス粒子はとても安定しています。別の方法を使ったタイターの検定サービス（ddPCRやTCDI50）もご利用になれます。