既製品IVT RNAとLNP RNA

Cap 0 は 真核生物mRNAsの 5’末端に5’－5’三リン酸結合によってN7-methylguanosine (m7G) が付加された状態（修飾）を指します。この修飾はいくつもの酵素反応を介して転写と共に行われ、核輸送や転写物の安定性、真核生物翻訳開始因子（eukaryotic translation initiation factor：eIF4E）による認識により翻訳を促進します。Cap 1はm7G cap （m7Gppp）に加えて、転写されたｍRNAの最初のヌクレオチドの2’Oにメチル基を付加した修飾（m7GpppNm）を指します。哺乳類細胞ではcap1構造はmRNAが自身のものであると認識する上で重要であり、自然免疫系に標的とされないために必要です。Cap 1構造を合成ｍRNAに付加することにより、in vivoでの発現が増強し、免疫原性が低下することが示されています。

in vitro転写RNAへのCappingは転写と共にCapアナログを使用して行うか、転写後に酵素反応によって行うことが可能です。弊社のCapping方法の効率はLC-MSを用いて十分に検証されています。

細胞は細胞質とエンドソームにRNAレセプターを持っているため、外来のRNAがレセプターによって認識されると免疫反応が活性化します。修飾ヌクレオチドは内在性RNAに共通して検出される構造です。特定の修飾ヌクレオチドを合成ｍRNAに取り込ませることにより、免疫原性をさせ、2次構造が変化し、またシークエンス依存的に翻訳効率と半減期を増加させることが可能です。当社では、使用例の多いN1-メチルシュードウリジン（N1-Methylpseudouridine :m1Ψ）を提供しています。 N1-メチルシュードウリジン (m1Ψ) はtRNAで初めて同定された自然界に存在するヌクレオチドで、mRNAにおける有効利用は最近になって知られるようになりました。このメチル化ウリジンは　　mRNA IVTと翻訳において従来のワトソン-クリック塩基対を変えることなく、ウリジンの代わりに取り込ませることができます。この修飾ヌクレオチドを利用する一番のメリットはmRNA治療においてRNAレセプターによる認識を防ぎ、不必要な免疫反応を抑制し、転写物の安定性と翻訳を増強できることです。