EGFP IVT mRNA
VectorBuilderのEGFP IVT mRNAは、目的に応じて修飾ヌクレオチド(N1-Methylpseudouridine, m1Ψ)の有り/無しを選択できます。EGFP IVT mRNAは、主要培養細胞やゼブラフィッシュのin vivo実験でEGFPの高発現が検証実験で確認されています。
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EGFP-mRNA
ゼブラフィッシュ EGFP IVT mRNA
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実験による検証
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図 1. HeLa細胞のEGFP IVT mRNA発現の結果。HeLa細胞を12ウエルプレートに播き、各ウエルあたり1ugのmRNAをトランスフェクションした。(A)24時間後、48時間後、72時間後のEGFP発現をフローサイトメトリーで定量した結果。平均蛍光強度 (Mean fluorescence intensities:MFI)(左縦軸)は色付き棒グラフで表示し、EGFP陽性細胞の割合(右横軸)は黒い●、■、▲で示している。エラーバーは標準偏差(SD)を示す。(B)EGFP mRNAトランスフェクションから48時間後の細胞のEGFPの発現を蛍光顕微鏡下で観察した(x100)。
図 2. in vitroおよびin vivoにおけるゼブラフィッシュEGFP IVT mRNAの発現。(A) 12 ウェルプレートで増殖させた 293T 細胞に、1 ウェル当たり 1 ug のゼブラフィッシュ EGFP mRNA をトランスフェクションした。トランスフェクション後72時間の代表的な画像は、110ntポリAテールがin vitroでEGFP発現を増加させることを示している。(B) 1細胞期のゼブラフィッシュ胚に、ゼブラフィッシュEGFP IVT mRNAを250pg注入し、6時間後にEGFP発現についてスクリーニングした。蛍光画像は、改変Kozak配列(version 2)を含むIVT mRNAをトランスフェクションしたゼブラフィッシュ胚で、従来のKozak配列(version 1)を含むIVT mRNAをトランスフェクションした場合よりも強いEGFPの発現が観察された。