ファージディスプレイによる抗体探索

• 抗原フォーマット: 可溶性タンパク質、短鎖ペプチド、DNA、mRNA、 細胞、AAV、またはウイルス様粒子 (VLPs)
• 動物プラットフォーム：ヒト化マウス^Hot、その他のげっ歯類、およびアルパカ

適切な動物プラットフォームと抗原フォーマットの選択は、免疫と抗体候補の同定を成功させるために重要です。当社のファージディスプレイのワークフローは、HuAbヒト化マウスやアルパカのような高度な動物モデルを統合することで効率的な治療用抗体探索を確実なものにしています。HuAbマウスでは、抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードする遺伝子領域がヒトの遺伝子に置き換えられているため、簡略化された抗体治療薬のin vivo探索を可能にします。アルパカは、天然VHH抗体（別名ナノボディ）の貴重な供給源です。VHH抗体は、より優れた抗原認識、高い安定性と組織透過性を提供し、また、その非常に小さなサイズと長いCDR3領域によりエンジニアリングも容易です。ベクタービルダーはこれらの動物を直接扱っているため、ナイーブB細胞レパートリーを免疫によって拡大することもできます。

VectorBuilderでは、免疫用に複数の抗原フォーマットを提供しており、調製した抗原はすべて厳格なQCを実施しています。また、抗原はお客様が調製したものをご提供いただくことも可能です。入手が容易で投与量をコントロールできるため、一般的に可溶性タンパク質が免疫抗原として好まれます。しかし、標的抗原が膜結合タンパク質の場合や免疫原性が低い場合には適さないことがあります。このような場合には、細胞、DNA、mRNA、VLP、ウイルスベースの免疫など、他の抗原フォーマットによる免疫方法を検討する必要があります。

• DNA合成、非免疫または免疫動物から採取された抗体配列
• NGSを用いたライブラリー評価も可能

ファージディスプレイライブラリーの構築には、新規合成配列ならびにナイーブ動物や免疫動物の抗体配列が利用できます。合成ライブラリーやナイーブライブラリーはより広い多様性をもつ抗体配列が得られる一方、免疫動物から作製するライブラリーはより抗原親和性の高い抗体配列を得ることができます。抗体配列の回収後は、ファージミドを用いたベクタークローニング、大腸菌の形質転換とライブラリーアセンブリを行います。構築されたライブラリーでは、組換えファージのそれぞれがカプシド表面にモノクローナル抗体を提示します。また当社では、ファージディスプレイライブラリーの均一性と全体的な品質をNGSを用いて検証しています。

• 機能性を持つファージクローンを濃縮するための多様なパニング戦略
• 独自の配列指向型超ハイスループットスクリーニング^Recommend

VectorBuilderは効率を大幅に向上させたハイスループット方法として、独自の配列指向型スクリーニング法（sequence-guided screening）を開発し、個々の抗体親和性スコアをバイアスなしに測定できます。3-5回の濃縮サイクルを経た後、ランキング上位のファージの親和性をELISAやフローサイトメトリーで検証します。

スクリーニングで同定された有望な抗体候補については発現と精製を行い、包括的な特性評価を行います。当社の特性評価サービスには以下のものがあります：

• 抗原認識の特異性の検証
• BLI (bio-layer interferometry)を用いた親和性（アフィニティー）測定と順位付け
• 抗体配列の決定
• エピトープビニング
• 交差反応性評価
• in vitro機能解析

HuAbマウス由来の抗体は完全なヒト抗体配列を持ちますが、アルパカやその他のげっ歯類由来の天然抗体は、治療用抗体としてさらなる最適化を必要とします。Vectorbuilderは、以下のサービスによってお客様の抗体候補を次のステージへと移行させることができます：

• 抗体のヒト化
• アフィニティーマチュレーション
• 初期段階の開発性評価

さらに、急速に進化する抗体医薬市場の需要に応えるため、各種抗体エンジニアリングサービスも提供しています：

• Fｃ領域エンジニアリング
• 二重特異性エンジニアリング
• バイオコンジュゲーション（抗体結合LNPなど）
• ＣＡＲ (Chimeric Antigen Receptor) エンジニアリング
• 安定発現細胞株作製