Tet制御因子発現細胞株
VectorBuilderは、モノクローン由来のTet制御因子発現細胞株を提供しています。誘導性遺伝子発現システムの構築において一貫性と効率を両立。TREまたはTRE3Gなどの誘導性プロモーター制御下の標的遺伝子を、ウイルスまたはプラスミドを用いてこれらの既製品細胞に導入することで、柔軟な実験デザインと信頼性の高い遺伝子発現誘導を実現することができます。
製品情報 プライスマッチ
出荷形態と保存方法
細胞（10% DMSO含有保存培地）はドライアイス便で輸送されます。受け取り後は、すぐに液体窒素の気相へ移してください（長期保存）。短期間（1週間以内）であれば-80°Cでの保存も可能です。
技術情報
図1. VectorBuilderのtTS/rtTA発現安定細胞株の主なワークフロー
Tet誘導性遺伝子発現を実現するには、VectorBuilderの既製品tTS/rtTA発現細胞にTRE制御下GOI発現 プラスミドまたはウイルスをトランスフェクションまたは形質導入するだけです。GOIの誘導発現は、適切な濃度のドキシサイクリンまたはテトラサイクリンで誘導後、RT-qPCR、ウェスタンブロット、または蛍光イメージングなどの適切なアッセイを用いて評価可能です。
詳細については、当社の誘導性遺伝子発現ソリューションおよびTet誘導性遺伝子発現ベクターシステムユーザーマニュアルをご参照ください。Tet制御因子発現細胞株で使用する誘導性GOI発現用カスタムプラスミドの設計については、ベクターデザインスタジオをご利用いただくか、デザインリクエストまでお問い合わせください。
実験による検証
図2. tTS/rtTA発現HEK293細胞の検証。TRE制御下EGFP発現レンチウイルスで細胞を形質導入し、その後抗生物質によって導入細胞を選択した。2 µg/mlドキシサイクリン（Dox）による誘導後（+ Dox）またはDox非存在下（- Dox）48時間後のEGFP発現を蛍光イメージングで評価した。倍率：100倍。
リソース
FAQ
既製品安定細胞株は、混合クローン（プール）由来ですか、それともモノクローン由来ですか？
VectorBuilderの既製品安定細胞株はすべてモノクローン由来であり、一貫した再現性を保証します。当社のモノクローン由来細胞株は、厳格な品質管理（QC）と機能の検証を実施しており、応用アッセイに安心してご使用いただけます。
Tet制御因子発現細胞株では、目的遺伝子の発現を駆動するためにどの誘導性プロモーターを使用すべきですか？
適切な誘導性プロモーターは、細胞株で発現している特定のTet制御因子によって異なります。細胞株がtTS/rtTA（第2世代）を発現している場合、目的遺伝子はTREプロモーターを使用する必要があります。細胞がTet3G（第3世代）を発現している場合、テトラサイクリンまたはそのアナログ（例：ドキシサイクリン）の存在下でTet3Gによって特異的に活性化されるTRE3Gプロモーターの下に遺伝子を配置しなければなりません。正しいプロモーターを使用することで、Tetシステムにおける遺伝子発現誘導の適切な制御が実現できます。詳細については、当社の哺乳動物誘導性プロモーターのページをご覧ください。適切な誘導性発現ベクターの設計には、当社のベクターデザインスタジオをご利用いただくか、デザインリクエストまでお問い合わせください。.
主な引用文献
A lysine-rich cluster in the N-BAR domain of ARF GTPase-activating protein ASAP1 is necessary for binding and bundling actin filaments
Anjelika Gasilina, et al.
J Biol Chem, 2022, doi: 10.1016/j.jbc.2022.101700
主な使用製品:
Abstract: Actin filament maintenance is critical for both normal cell homeostasis and events associated with malignant transformation. The ADP-ribosylation factor GTPase-activating protein ASAP1 regulates the dynamics of filamentous actin-based structures, including stress fibers, focal adhesions, and circular dorsal ruffles. Here, we have examined the molecular basis for ASAP1 association with actin. Using a combination of structural modeling, mutagenesis, and in vitro and cell-based assays, we identify a putative-binding interface between the N-Bin-Amphiphysin-Rvs (BAR) domain of ASAP1 and actin filaments. We found that neutralization of charges and charge reversal at positions 75, 76, and 79 of ASAP1 reduced the binding of ASAP1 BAR-pleckstrin homology tandem to actin filaments and abrogated actin bundle formation in vitro. In addition, overexpression of actin-binding defective ASAP1 BAR-pleckstrin homology [K75, K76, K79] mutants prevented cellular actin remodeling in U2OS cells. Exogenous expression of [K75E, K76E, K79E] mutant of full-length ASAP1 did not rescue the reduction of cellular actin fibers consequent to knockdown of endogenous ASAP1. Taken together, our results support the hypothesis that the lysine-rich cluster in the N-BAR domain of ASAP1 is important for regulating actin filament organization.
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The KU-PARP14 axis differentially regulates DNA resection at stalled replication forks by MRE11 and EXO1
Ashna Dhoonmoon, Claudia M. Nicolae & George-Lucian Moldovan.
Nature Communications, 2022, doi: 10.1038/s41467-022-32756-5
主な使用製品:
Abstract: Suppression of nascent DNA degradation has emerged as an essential role of the BRCA pathway in genome protection.In BRCA-deficient cells, the MRE11 nuclease is responsible for both resection of reversed replication forks, and accumulation of single stranded DNA gaps behind forks. Here, we show that the mono-ADP-ribosyltransferase PARP14 is a critical co-factor of MRE11. PARP14 is recruited to nascent DNA upon replication stress in BRCA-deficient cells, and through its catalytic activity, mediates the engagement of MRE11. Loss or inhibition of PARP14 suppresses MRE11-mediated fork degradation and gap accumulation, and promotes genome stability and chemoresistance of BRCA-deficient cells. Moreover, we show that the KU complex binds reversed forks and protects them against EXO1-catalyzed degradation. KU recruits the PARP14-MRE11 complex, which initiates partial resection to release KU and allow long-range resection by EXO1. Our work identifies a multistep process of nascent DNA processing at stalled replication forks in BRCA-deficient cells.
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